禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒適用于禽支氣管炎病毒檢測，可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。

產品型號：50T

更新時間：2025-05-29

廠商性質：生產廠家

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PCR試劑盒

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　　一、禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒

　　二、通用名稱：禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

　　三、包裝規格 50T/盒

　　四、預期用途：

　　適用于禽支氣管炎病毒檢測，可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。

　　五、禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒原理：

　　針對禽支氣管炎病毒基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含禽支氣管炎基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

檢驗方法
1. 試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

單反液配制表(每份)	RT-PCR反應液	15.0 μL
	逆轉錄酶	2.0 μL
	Taq酶	3.0 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4. PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。

反應體積	25 μL	通道選擇	FAM通道采集禽白血病病毒熒光信號
PCR 反應條件	步驟	條件	循環數
	反轉錄	42℃：10分鐘（min）	1
	預變性	95℃：3分鐘（min）	1
	預擴增	95℃：5秒（s）	5
	預擴增	55℃：40秒（s）	5
	PCR擴增	95℃：5秒（s）	40
	PCR擴增	55℃：40秒（s）（此階段結束時采集熒光信號）	40

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇 None。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數增長期。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長期。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長期，則判定為陽性，否則為陰性。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

【檢驗結果的解釋】

通道及檢測結果	標本檢測結果解釋
FAM	標本檢測結果解釋
+	標本中檢出禽白血病病毒RNA
-	標本中未檢出禽白血病病毒 RNA