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    大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

    發(fā)布時間:2018/7/14點擊次數(shù):1162

    大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

    本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中二肽基肽酶-4(DPP-4)含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)水平。用純化的大

    鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入

    二肽基肽酶-4(DPP-4),再與HRP標記的二肽基肽酶-4(DPP-4)抗體結(jié)合,形成抗體-抗

    原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍

    色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的二肽基肽酶-4(DPP-4)呈

    正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠二

    肽基肽酶-4(DPP-4)濃度。

    大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(800ng/L)0.5ml×1瓶

    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

    標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

    1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

    釋。

    400ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

    200ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

    100ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

    50ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

    25ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

    待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,

    然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

    重復5次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。

    7.溫育:操作同3。

    8.洗滌:操作同5。

    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

    15分鐘.

    10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

    11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止

    液后15分鐘以內(nèi)進行。

    操作程序總結(jié):

    計算

    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的

    OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標

    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

    即為樣品的實際濃度。

    大鼠二肽基肽酶-4(DPP-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

    用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui

    控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請每次測定的同時做標準曲線,zui好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值

    大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計

    算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

     

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