小反芻獸疫病毒檢測(cè)試劑盒的檢驗(yàn)方法主要包括病毒分離培養(yǎng)和鑒定、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、熒光定量PCR、抗體ELISA檢測(cè)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)以及膠體金試劑卡檢測(cè)。
1.病毒分離培養(yǎng)和鑒定
病毒分離：采集病料如眼瞼下結(jié)膜分泌物、鼻腔分泌物、頰部、直腸黏膜拭子等，接種至羊腎原代細(xì)胞或VERO細(xì)胞中培養(yǎng)。
病毒培養(yǎng)：將處理過的樣品接種到已形成良好單層的細(xì)胞中，置于37℃吸附1小時(shí)，傾去接種液，加入維持液后繼續(xù)培養(yǎng)，逐日觀察細(xì)胞變化。
病毒鑒定：通過觀察細(xì)胞病變情況，如細(xì)胞變圓、集合等現(xiàn)象，結(jié)合病毒中和試驗(yàn)進(jìn)行陽性判定。
2.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）
引物設(shè)計(jì)：使用特定的上下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
擴(kuò)增程序：經(jīng)過一系列溫度循環(huán)后，通過電泳分析PCR產(chǎn)物，若在特定位置出現(xiàn)特異性擴(kuò)增條帶則判為陽性。
3.熒光定量PCR
引物和探針：使用特異性引物和熒光探針。
結(jié)果判定：根據(jù)擴(kuò)增曲線和Ct值判斷樣品是否為PPRV陽性。
4.抗體ELISA檢測(cè)
原理：采用阻斷ELISA方法原理進(jìn)行檢測(cè)。
操作：嚴(yán)格按照商品說明書操作和判斷結(jié)果。
5.瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)
操作步驟：取血清樣品與標(biāo)準(zhǔn)血清、抗原分別加入瓊脂板的孔中，靜置后移入濕盒內(nèi)室溫反應(yīng)。
結(jié)果判定：根據(jù)沉淀線的出現(xiàn)與否及其與陽性對(duì)照的關(guān)系判斷結(jié)果。
6.膠體金試劑卡檢測(cè)
操作方法：使用商品化的膠體金試劑卡，按照說明書進(jìn)行操作和判斷。
更新時(shí)間：2025-01-14
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