ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定標(biāo)本分解

　　正確實(shí)驗(yàn)我們才可以得到有效的數(shù)據(jù)，要是操作錯誤不僅會得到的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，還浪費(fèi)我們時間。下面給大家講解一下ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定標(biāo)本分解。
 

　　一、標(biāo)本溶血
 

　　由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血。
 

　　二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
 

　　因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 

　　三、標(biāo)本保存不當(dāng)
 

　　在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時間過長(如一天以上)，有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
 

　　四、標(biāo)本凝集不全
 

　　在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br /> 

　　五、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
 

　　抗凝劑(如肝素，EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
 

　　通過以上的分析和總結(jié)，臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)假陽性或假陰性等錯誤的結(jié)果，排除ELISA試劑盒因素和操作因素，再有就是從標(biāo)本因素進(jìn)行分析，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾，從而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。