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    魚補體3(C3)酶聯免疫分析試劑盒

    更新時間:2019-12-31點擊次數:987

    魚補體3(C3)酶聯免疫分析試劑盒

    本試劑盒僅供研究使用。

    檢測范圍: 96T

    10µg/ml -450µg/ml

    使用目的:

    本試劑盒用于測定魚血清、組織勻漿及相關液體樣本中補體 3(C3)含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚補體 3(C3)水平。用純化的魚補體 3(C3)抗體

    包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入補體 3(C3),再與 HRP 標記的補 體 3(C3)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的補體 3(C3)正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中魚補體 3(C3)濃度。

    魚補體3(C3)酶聯免疫分析試劑盒組成

    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

    2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(800µg/ml) 0.5ml×1 瓶

    3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

    5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

    6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

    標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    魚補體3(C3)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

    釋。

    400µg/ml 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    200µg/ml 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    100µg/ml 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    50µg/ml 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    25µg/ml 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

    待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

    然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

    重復 5 次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

    7. 溫育:操作同 3。

    8. 洗滌:操作同 5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

    10 分鐘.

    10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

    液后 15 分鐘以內進行。

    操作程序總結:

    計算

     以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

    OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

    即為樣品的實際濃度。

    魚補體3(C3)酶聯免疫分析試劑盒注意事項

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

    用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值

    大于標準品孔di一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計

    算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    1. 底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6 個月

    熱線電話:17317792356

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