呋喃妥因代謝物檢測(cè)試劑盒各類樣本的處理方法分析
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：0.36M亞硝基鐵qing化鉀溶液（牛奶、奶粉樣本）
11.9g亞硝基鐵qing化鉀加去離子水至100ml溶解。
配液2：1.04M硫酸鋅溶液（牛奶、奶粉樣本）
29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。
配液3：0.1M K2HPO4 溶液
稱11.4g K2HPO4?3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。
配液4：1M HCL
8.6mL濃HCL加去離子水定容至100mL。
配液5：1M NaOH溶液
稱取4g NaOH，加去離子水定容至100ml。
配液6：復(fù)溶液
將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 牛奶樣本處理方法
1）取5ml樣本于離心管中，加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液（配液1）振蕩混合30秒，加250ul 硫酸鋅溶液（配液2）振蕩混合30秒，15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取上清1.1ml，加4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；
3）在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃（超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果）水浴孵育3小時(shí)；
4）分別加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯，振蕩5分鐘；
5）室溫下4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘；
6）取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中，50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>
7）用1ml正已烷溶解殘留物，加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒；室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘；
8）去除上層正已烷，取50μl下層液用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)為2 檢測(cè)下限：0.04ppb
5.3.2 奶粉、蛋粉樣本處理方法
1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中，加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；
2）在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃（超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果）水浴孵育3小時(shí)；
3）加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液（配液1）振蕩混合30秒，加250ul 硫酸鋅溶液（配液2）振蕩混合30秒，15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
4）取全部上清到另一個(gè)離心管中，后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，4）”
5.3.3 蜂蜜、組織、腸衣、肝臟、飼料、雞蛋樣本處理方法
1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中，加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；
2）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，3）”
5.3.4 熟食樣本處理方法
1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于50ml離心管中，加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水，振蕩2min，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，去除全部液體；
2）加入5ml乙氰和5ml正己烷，振蕩2min，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，去除全部液體；
3）在沉淀中加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；
注：熟食的添加回收試驗(yàn)請(qǐng)?jiān)诖瞬郊尤敫邩?biāo)準(zhǔn)。
4）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，3）”
